脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响

Ｊ　Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ　Ｕｎｉｖ　Ｍ嚣　医ｃ（　ｅｄ　Ｓｃ学　ｉ　Ｅ版ｄｉ；２）一。…’１２，　０ｃｔ；’３一、１（５‘　）：’　６１３‘　‘６１５　ｅａｓｔ　ＵｎｉｖＳｏｕｔｈ南大学学・６ｌ３・　脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞　胶原合成的影响　纪少军，万立，李凤玉，贾国洪，闫永宏，石军　（第二五一医院急诊科，河北张家口０７５０００）　［摘要］目的：研究脂多糖（１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响，以阐明ＬＰＳ　在皮肤创伤愈合中的可能作用。方法：体外培养正常人皮肤成纤维细胞，采用　Ｈ一脯氨酸掺入法观察不同浓　度（０、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．５和１．０　ｔｘｇ・ｍｌ　）的ＬＰＳ对成纤维细胞胶原合成的影响。结果：ＬＰＳ刺激浓　度在０．００５　ｔｘｇ・ｍｌ　时，皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成增加；随着刺激浓度增加，刺激作用增强；但当ＬＰＳ浓　度为０．５　Ｉｘｇ・ｍｌ　时，促胶原合成作用开始降低；当浓度达到１．０　ｔｘｇ・ｍｌ　时则呈现抑制效应。结论：在一定　浓度范围内ＬＰＳ促进成纤维细胞胶原合成，表明ＬＰＳ在皮肤创伤愈合中可能具有重要作用。　［关键词］脂多糖；胶原；成纤维细胞；创面愈合　［中图分类号］Ｑ５１６；Ｒ３３５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１６７１。６２６４（２０１２）０５。０６１３‘０３　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１。６２６４．２０１２．０５．０２０　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｌｉｐ０ｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ＪＩ　Ｓｈａｏ　ｊｕｎ，ＷＡＮ　Ｌｉ，ＬＩ　Ｆｅｎｇ’ｙｕ，ｄｌＡ　Ｇｕｏ。ｈｏｎｇ，ＹＡＮ　Ｙｏｎｇ。ｈｏｎｇ，ＳＨＩ　Ｊｕｎ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＥｍｅｒｇｅｎｃｙ，２５１ｔｈ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｆＰ　，Ｚｈａｎｇｊｏｉａｋｏｕ　０７５０００，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　１ｉｐｏｐｏ１ｙｓａｃｃｈａｒｊｄｅ（ＬＰＳ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ＬＰＳ　ｆｏｒ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｐｅｒｉｏｄ　ｏｆ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｐｅｐｓｉｎ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈ—ｐｒｏｌｉｎｅ　ｉｎｔｏ　ｓｔａｂｌｅ，ｓｉｎｇｌｅ。ｌａｙｅｒｅｄ，ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｗｈｅｎ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｗｉｔｈ　ＬＰＳ　ａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　０．００５　Ｉｘｇ・ｍｌ～．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬＰＳ　ｗａｓ　０．５　Ｉｘｇ・ｍｌ～，ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＬＰＳ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｋｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｂｅｇａｎ　ｔｏ　ｄｅｃｒｅａｓｅ；　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬＰＳ　ｒｅａｃｈｅｄ　１．０　ｔｘｇ・ｍｌ～，ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｆｕｓｉｏｎ：　ＬＰＳ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　ｓｋｉｎ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｅｘｔｅｎｔ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ＬＰＳ　ｍｉｇｈｔ　ｐｌａｙ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｌｉｐｏｐ０１ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｃｏｌｌａｇｅｎ；ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ　创面愈合是一个复杂的生物学过程，包括炎症反　［收稿日期］２０１２—０５‘２２　［修回日期］２０１２－０６—０３　应、细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等基本环节。成纤　［基金项目］国家自然科学基金资助项目（３０３７１４６７）　［作者简介］纪少军（１９７２一），男，河北张家口人，主治医师。Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉ￣１３９＠１２６．ｃｏｌｌｌ　・６ｌ４・　维细胞作为创面修复的主要细胞之一　，其增殖和胶　原合成的变化直接影响创面修复的结局。我们既往研　究证实，细菌脂多糖（１ｉｐｏｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）可以刺　激正常人皮肤成纤维细胞增殖　。为了探讨ＬＰＳ在　创面修复中的作用，我们研究ＬＰＳ对正常人皮肤成纤　维细胞胶原合成的影响。　１材料与方法　１．１标本来源　标本来源于我科收治的整形患者２０例，其中男　１１例，女９例，年龄２～５６岁，平均（２０±１５）岁。　１．２主要试剂及仪器　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改良的培养基；ＬＰＳ　Ｅ．ｃｏｌｉ　０５５：Ｂ５；胎牛　血清；　一脯氨酸；。Ｈ一脯氨酸；酶联免疫标记仪。　１．３成纤维细胞培养　原代培养采用组织块法　Ｊ。　１．４　ＬＰＳ作用浓度　用４％基础培养基稀释ＬＰＳ，参照既往研究报告确　定ＬＰＳ的实验浓度　ｊ，作用浓度为０．００５、０．０１、　０．０５、０．１、０．５和１．０　Ｉ．ｚｇ・ｍｌ。。。　１．５成纤维细胞胶原合成的检测　取对数生长期的成纤维细胞，以含１０％ＦＣＳ的　ＤＭＥＭ培养基制成１×１０　个・ｍｌ　的细胞悬液，接种　于９６孔平底培养板中，每孔２００　Ｉｘｌ，在相同培养条件　下，细胞贴壁后，各组正常成纤维细胞更换预先配置的　ＬＰＳ工作液，每个ＬＰＳ浓度设４个平行孔。以加ＬＰＳ　工作液时间为准，第２天将２４　ｈ标记期的　Ｈ一脯氨酸　掺人（掺入量０．５　ｃｉ・孔　）稳态、融合的单层培养成　纤维细胞中　，第３天采用胃蛋白酶消化法检测培养　液中胶原量，实验结果以ｄｐｍ・（１　０００细胞）一表示。　１．６统计学处理　采用ＳＰＳＳ　ｌ１．０统计软件进行单因素方差分析，　Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。　２　结　果　ＬＰＳ对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响：　ＬＰＳ刺激浓度在０．００５～０．５　ｇ・ｍｌ　时，促进正常皮　肤成纤维细胞的胶原合成。ＬＰＳ浓度在０．００５～　０．１　Ｉ，ｚｇ・ｍｌ　时，ＬＰＳ刺激浓度和成纤维细胞胶原合成　之问存在量效依赖关系；当ＬＰＳ浓度为０．５　ｇ・ｍｌ一　时，促成纤维细胞胶原合成作用开始降低，当ＬＰＳ浓　度达到】　ｇ・ｍｌ　时，成纤维细胞胶原合成受到抑制。　其中，ＬＰＳ浓度为０．０５　Ｉｘｇ・ｍｌ　和０．１　ｇ・ｍｌ　时，胶　原合成量分别为（３９１．７５±１４．１９８）和（４３５．００±　东南大学学报（医学版）　２０１２年１０月，３１（５）　１７．４７３）ｄｐｍ・（１　０００细胞）～，显著高于正常皮肤成纤　维细胞［（２８１．５０±１７．５４０）ｄｐｍ・（１　０００细胞）　］　（Ｐ＜０．０１）。当ＬＰＳ浓度达到１．０　Ｉｘｇ・ｍｌ　时，已明显　抑制成纤维细胞胶原合成［（２１５．００±１９．１４８）ｄｐｍ・　（１　０００细胞）　］（Ｐ＜０．０１）。　３讨　论　成纤维细胞作为创面修复的主要细胞，它能分泌　胶原蛋白等细胞外基质，可以通过分泌一氧化氮合酶　和角质化细胞生长因子等细胞因子对创伤修复过程起　调节作用。创伤环境及创面外用药物都在一定程度上　含有ＬＰＳ。我们既往研究证实，细菌ＬＰＳ可以刺激正　常人皮肤成纤维细胞增殖　ｊ。而通过刺激成纤维细　胞增殖和胶原合成是许多药物促进创面修复的主要机　制之一。因此，研究ＬＰＳ对成纤维细胞增殖和胶原合　成的影响，对阐明ＬＰＳ对创伤愈合的影响具有重要　意义。　Ｈ－脯氨酸掺人实验结果显示，ＬＰＳ对成纤维细胞　胶原合成也具有双重作用，低浓度时促进成纤维细胞　胶原合成，高浓度时抑制成纤维细胞胶原合成；其原因　可能是：（１）通过刺激或抑制成纤维细胞的增殖，使成　纤维细胞数量改变，影响胶原合成；（２）ＬＰＳ改变了成　纤维细胞的生物学特性，使单个成纤维细胞的胶原合　成量增加。李从青等　研究也证实了ＬＰＳ通过与单　核细胞表面ＣＤ１４分子或可溶性ＣＤ１４分子作用，将细　胞信号传导到胞核而刺激多种细胞合成和释放细胞因　子。徐荔等　的研究也证实了ＬＰＳ对细胞因子的合　成和释放具有促进作用。ＬＰＳ对成纤维细胞胶原合成　的作用可能与其对细胞因子的影响有关。　综上所述，ＬＰＳ改变了正常人皮肤成纤维细胞的　某些生物学特性，通过促进胶原蛋白合成而促进创面　愈合，并且不同浓度ＬＰＳ在创面愈合中的作用不同。　［参考文献］　［１］ＫＯＨＹＡＭＡ　Ｔ，ＬＩＵ　Ｘ，ＷＥＮ　Ｆ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｍｏｄｕｌａｔｅ　ｃｉｌｏｍｉｌａｓｔ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　２００４，１１１（３）：２９７　３０２．　［２］杨红明，付小兵，柴家科，等．脂多糖对皮肤纤维母细胞和　表皮细胞的影响［Ｊ］．医学杂志，２０００，２５（６）：　４２８－４２９．　『３］ＢＡＢＵ　Ｍ，ＤＩＥＧＥＬＭＡＮＮ　Ｒ，ＯＬＩＶＥＲ　Ｎ．Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ　ｉｓ　ｏｖｅｒ—　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｋｅｌｏｉｄ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ａｂｎｏｒｍａｌ　ｗｏｕｎｄ　ｈｅａｌｉｎｇ　［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，１９８９，９（４）：１６４２—１６５０．　［４］ＹＡＮＧ　Ｈ　Ｍ，ＫＡＮＫＯ　Ｍ，ＨＥ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａ　ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｅ—　ｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ａｎｄ　ｋｅｒａ—　东ＪＳｏｕｔ南ＳｏｕｔｈｈｅａｓｔＵｎｉ大学学ｅａｓｔＵｎｉｖｖ　Ｍｅｄ　报‘医（ＭｅｄＳｃ　Ｅｄ　学版ＳｃｉＥｄｉ、…２。１２，。ｃｔ；一，　’　３１（５）：／‘　６ｌ５　６ｌ６　・６１５・　ｔｉｎｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ　Ｒｅｓ，２００２，１６（１）：４３—４７．　［７］李从青，姚洁，刘长明，等．内毒素对妊娠期糖尿病患者外　［５］董波，陈肖华，张浩，等．一种改进的用于测定细胞周期的　周血单核细胞ＴＬＲ一４　ｍＲＮＡ及ＮＦＫ—Ｂ　ｍＲＮＡ表达的影响　细胞制备方法［Ｊ］．军事医学科学院院刊，２００２，２６（２）：　［Ｊ］．安徽医科大学学报，２０１ｌ，１ｌ（３）：５０—５３．　１２４－１２９．　［８］徐荔，何小鹃，柴旺，等．黄芪多糖对内毒素诱导巨噬细胞　［６］倪杰，戴厚永，郑敏，等．抗体芯片在糖尿病肾病大鼠尿液　产生ＴＮＦ一　、ＩＬ一１Ｂ及ＮＯ的影响［Ｊ］．中国中医基础医学　细胞因子同步检测中的应用［Ｊ］．东南大学学报：医学版，　杂志，２０１１，１７（５）：６２—６３．　２０１２。３１（３）：２４９—２５３．　・论　著・　脑电图在小儿病毒性脑炎临床早期　诊断中的应用价值　沙宁，单春明　（江苏省淮安市第二人民医院儿内科，江苏淮安２２３００１）　［摘要］目的：分析血常规、脑电图、脑脊液、ＣＴ、ＭＲＩ在小儿病毒性脑炎临床早期诊断中的应用价值。方法：　对１４０例小儿病毒性脑炎患儿的血常规、脑电图、脑脊液、ＣＴ、ＭＲＩ结果进行对比。结果：血常规异常率　３６．４２％，脑脊液异常率３８．５７％，ＣＴ异常率２２．８９％，ＭＲＩ异常率３７．８３％，脑电图异常率９２．１４％，脑电图　异常率最高。结论：脑电图对小儿病毒性脑炎早期诊断有重要的价值。　［关键词］小儿；病毒性脑炎；脑电图　［中图分类号］Ｒ７４８　［文献标识码］Ｂ　［文章编号］１６７１‘６２６４（２０１２）０５—０６１５—０２　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１。６２６４．２０１２．０５．０２１　为了能够做￣ＩｓＪ，Ｊｋ病毒性脑炎的早期诊断、早期　床诊断均符合《诸福棠实用儿科学》病毒性脑炎的诊　治疗，降低后遗症的发生，现将我院２００９年９月至　断标准…。１４０例患儿在人院４８　ｈ内均行血常规、脑　２０１１年８月收入院的１４０例病毒性脑炎患儿的血常　脊液、脑电图检查。有１２０例进行影像学检查，其中　规、脑脊液、ＣＴ、ＭＲＩ、脑电图改变进行回顾性总结　８３例进行ＣＴ扫描，３７例行ＭＲＩ检查。　分析。　２　结　果　１资料与方法　２．１血常规检查结果　１．１　一般资料　入院后均行血常规检查，白细胞计数正常［（４～　本组病例１４０例，其中男７５例，女６５例，年龄８　１０）Ｘ　１０　Ｌ　］８９例，计数升高（＞１０　Ｘ　１０　Ｌ　）３３例，　个月一１４岁，包括婴儿７例，幼儿３０例，学龄前儿童　计数降低（＜４　Ｘ　１０　Ｌ　）１８例；淋巴细胞计数异常３７　６６例，学龄儿童３７例。四季均有发病，但以冬春季　例，其中升高（绝对值＞１０　Ｘ　１０　Ｌ　）３１例，降低（绝　多见。　对值＜０．８　Ｘ　１０　Ｌ　）６例。　１．２方法　２．２脑脊液检查结果　详细询问病史并进行仔细体格检查，本组病例临　１４０例均于发病４８　ｈ内行腰穿检查。结果显示，脑　［收稿日期］２０１２‘０２—０８　［修回日期］２０１２—０５—１４　［作者简介］沙宁（１９８１一），男，江苏淮安人，住院医师。Ｅ　ｍａｉｌ：ｓｈｉｎｅ１９８１＠ｙａｈｏｏ．ｅｎ　［通信作者］单春明Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｈａｎ６９０３＠１６３．ｅｏｍ