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甲基化特异性PCR的甲基化特异性PCR

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其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。因此从理论上讲,用不同的引物做PCR,即可检测出这种差异,从而确定基因有无CpG岛甲基化。根据目的基因修饰前后的改变,就可以相应设计M和U引物,有时我们需要设计两轮引物。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳,凝胶扫描观察分析结果。
这种方法灵敏度高,无需特殊仪器,因此经济实用,是目前应用最为广泛的检测方法。不过也存在一定的局限性,预先需要知道待测片段的DNA序列,引物的设计非常重要。另外,亚硫酸氢盐处理也十分关键,若处理不完全则可能导致假阳性的出现。

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